苯扎溴铵的液相色谱分析
国内、外有关苯扎溴（氯）铵定性分析的报道较少[1]，定量分析报道较多，有紫外分光光度法、滴定法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、液相色谱质谱联用法、毛细管电泳-三重四级杆法等 [2~13]。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
标准品：十二烷基二甲基苄基溴化铵，95 %，靖江康爱特化工制造有限公司；十二烷基二甲基苄基氯化铵，99 %；十四烷基二甲基苄基氯化铵，98 %；十六烷基二甲基苄基氯化铵；甲醇，HPLC级；三氟乙酸，分析纯；一级水，自制；样品均在市场上购买。
Waters 600型高效液相色谱仪、Waters 2996型二极管阵列紫外检测器，Elite SinoChrom ODS-BP，5 mm，4.6 mm×250 mm色谱柱，Rheodyne 7725i六通阀进样器，Empower Pro 中文版色谱工作站。
戴安DX-120型离子色谱仪，配ASRS-ULTRA自身再生抑制器和CDM-3电导检测器，AS9-HC(4 mm×250 mm)色谱柱，N-2000色谱工作站。
1.2 分析条件
高效液相色谱：流动相：甲醇 : 2.4 mmol﹒L -1三氟乙酸水溶液= 77:23（V:V），流速1.0 mL﹒min-1，氦气（99.999 %）喷射鼓泡脱气，进样体积10 mL，检测波长207 nm。典型保留时间（min）：十二烷基二甲基苄基氯化铵，6.0，十四烷基二甲基苄基氯化铵，11.4，十六烷基二甲基苄基氯化铵，24.8。
离子色谱：淋洗液：9 mmol﹒L-1 Na2CO3水溶液，流速0.8 mL﹒min-1，抑制器电流50 mA，进样体积25 mL。保留时间（min）：氯离子，6.3，溴离子，9.0。
1.3 溶液配制
1.3.1 混合标准工作溶液
分别称取0.1 g（精确至0.000 2 g）十二烷基二甲基苄基氯化铵、十四烷基二甲基苄基氯化铵、十六烷基二甲基苄基氯化铵标准品于100 mL容量瓶中，摇匀，一级水定容，按比例稀释进样分析。
1.3.2 标准工作溶液
称取0.1 g（精确至0.000 2 g）十二烷基二甲基苄基溴化铵标准品于100 mL容量瓶中，摇匀，一级水定容，稀释5倍进样分析。
1.3.3 样品溶液
分别称取约含0.5 g 新洁尔灭（精确至0.000 2
g）样品于100 mL容量瓶中，一级水定容，直接进样。
1.4 高效液相色谱分析条件的优化
1.4.1 色谱柱的选择
分别选用Elite SinoChrom ODS-BP，5 mm（4.6 mm×250 mm），Agela Venusil MP C18，5 mm（4.6 mm×250 mm），Waters XTerra RP18，5 mm（4.6 mm×250 mm）色谱柱对混合标准工作溶液进行分析，选择最佳色谱柱。
1.4.2 改性剂的选择
分别选用甲酸、乙酸、三氟乙酸和磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液为改性剂，调节pH，选择最佳改性剂。
1.4.3 流动相比例的选择
使用Elite SinoChrom ODS-BP色谱柱，流动相以甲醇 : 2.4 mmol﹒L -1三氟乙酸水溶液 = 65 : 35，75 : 25，77 : 23，80 : 20（V/V）进行试验，确定最佳配比。
1.5 液相色谱法对样品的鉴别
以1.3.1和1.3.2的标准溶液为标样，在1.2的分析条件下分别用高效液相色谱和离子色谱对样品进行定性鉴别。
1.6 高效液相色谱方法学数据测定
1.6.1 标准曲线
在10 ~ 800 mg﹒L -1的浓度范围内，建立十二烷基二甲基苄基溴化铵11个浓度水平的标准曲线。
1.6.2 准确度
在样品中倍量式添加十二烷基二甲基苄基溴化铵30 mg﹒L -1、300
mg﹒L -12个浓度水平，每个水平5次重复，计算回收率。
1.6.3 精密度
称取0.5 g（精确至0.000 1 g）新洁尔灭3#于100 mL容量瓶中，一级水定容，8次重复测定，计算相对标准偏差。
1.7 购买商品样品测定结果
在1.2的分析条件下采用高效液相色谱法对1.3.3配制的新洁尔灭1#、新洁尔灭2#、新洁尔灭3#样品进行定量分析。
2 结果与讨论
2.1 高效液相色谱分析条件的确定
2.1.1 色谱柱的选择结果
Elite SinoChrom ODS-BP能够将组分与杂质分离且响应值较高，峰形佳。余组分不能与杂质完全分离、响应值低且峰形宽。
2.1.2 改性剂的选择结果
同一摩尔浓度的乙酸、甲酸、三氟乙酸作为改性剂时，发现酸性越强，标准样品阳离子越容易与酸阴离子形成离子对，保留时间越长，分离效果越好。以乙酸为改性剂时，杂质与十二烷基二甲基苄基氯化铵未完全分离；当改性剂为甲酸和三氟乙酸时，杂质能够得到分离，但使用甲酸的响应值低于三氟乙酸，且峰形拖尾严重。当改性剂为磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲溶液时，保留时间过长（约54 min），峰形差，拖尾严重。
分别以1.2 ~ 16.5 mmol﹒L -1三氟乙酸作改性剂分析时，酸浓度越低，响应值越高，峰形越好；当三氟乙酸为1.2 mmol﹒L -1时，十二烷基二甲基苄基氯化铵保留时间太短，未与杂质完全分离。综合考虑响应值和分离度，改性剂选用2.4 mmol﹒L -1三氟乙酸。
2.1.3 流动相比例的选择
流动相中甲醇比例提高，保留时间缩短，响应值增大，峰形越好。但当甲醇比例达到80 %时，十二烷基二甲基苄基氯化铵保留时间太短，未能与杂质完全分离，甲醇77 %的比例合适。
2.2 标准曲线
在定量上，苯扎溴铵与苯扎氯铵的阳离子部分是相同的。十二烷基二甲基苄基铵盐（以溴铵盐代表）的标准曲线方程为Y = 141
85 X＋263
842，相关系数r =0.999 8。十二、十四、十六烷基二甲基苄基铵盐（以氯铵盐代表）混合标准溶液的高效液相色谱图见图1。
1-十二烷基二甲基苄基氯化铵；2-十四烷基二甲基苄基氯化铵；3-十六烷基二甲基苄基氯化铵
图1 3种氯化二甲基苄基烃铵混合标准溶液高效液相色谱图
2.3 准确度与精密度
十二烷基二甲基苄基溴化铵30 mg﹒L -1添加水平的回收率为99.57
% ~ 100.85 %，平均回收率为100.17 %；300
mg﹒L -1添加水平的回收率为99.35
% ~ 100.65 %，平均回收率为99.94 %。8次重复测定的相对标准偏差为0.45
%。
2.4 样品测定结果
在1.2分析条件下，测定结果与样品标签标注含量基本一致（表3）。HPLC鉴定表明3个样品均为混合物，IEC鉴定证实2个新洁尔灭样品用氯铵冒充溴铵。
参 考 文 献
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